細胞名稱：JIMT-1人乳腺癌細胞

種屬來源：人

性別年齡：女性，62歲

組織來源：乳腺

生長特性：貼壁生長

細胞形態(tài)：上皮細胞樣

細胞規(guī)格：1 X 10⁶cells/T25或1 mL凍存管

培養(yǎng)條件：DMEM + 10% fetal bovine serum (FBS)+1%P/S

         37 ℃, 5% CO2

凍存條件：90% FBS + 10% DMSO

傳代方法：1:2-1:6傳代, 2-3天傳1代

細胞培養(yǎng)操作

干冰運輸：收到細胞后需立即轉入液氮保存、或者-80°C冰箱短期凍存、或者直接復蘇

常溫運輸：收到細胞后，請立即將細胞培養(yǎng)瓶從包裝盒中取出，并按照下方操作步驟進行培養(yǎng)傳代

細胞傳代：細胞密度達80% - 90%，即可進行傳代培養(yǎng)

培養(yǎng)瓶中細胞操作步驟

對于貼壁培養(yǎng)的細胞，寄送前，我們會將培養(yǎng)基充滿整個培養(yǎng)瓶，以減少產(chǎn)品運輸過程中貼壁細胞的脫落。

1. 收到細胞后，請注意觀察是否有污染。將培養(yǎng)瓶置于倒置顯微鏡下仔細檢查是否渾濁、是否細菌污染。因為運輸過程中存在顛簸，且有些細胞對溫度變化也很敏感，可能存在一些細胞脫落漂浮的情況，這些細胞仍是活細胞，請勿丟棄，可離心富集后傳代使用。

2. 對于貼壁細胞，在生物安全柜環(huán)境中，用真空泵去除培養(yǎng)瓶中多余的培養(yǎng)基，至剩余5-8mL 左右，隨后根據(jù)培養(yǎng)基選擇合適的CO2含量的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，擰松瓶蓋。如果細胞已經(jīng)長滿培養(yǎng)瓶，請立即傳代。

3. 對于懸浮的細胞，在生物安全柜環(huán)境中，轉移培養(yǎng)瓶中的細胞至離心管，150 g 離心 5 分鐘，去除上清后，用5 mL培養(yǎng)基吹散細胞，轉移至新的培養(yǎng)瓶中，隨后置于合適的CO2含量的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

凍存管細胞操作步驟

注意： 為保證細胞的高活率，請收到產(chǎn)品后，立即解凍培養(yǎng)。

1. 將凍存管置于37℃水浴中來回晃動，迅速解凍。為避免污染，確保凍存管口置于水面之上。解凍需迅速，大約1分鐘。

2. 一旦凍存管中液體融化后，立即取出，采用酒精噴拭凍存管表面。從此步開始，后續(xù)操作須在生物安全柜中完成。

3. 將凍存管中的液體轉移到含有5mLwan全培養(yǎng)基的離心管中，150 g 離心 5 分鐘，用真空泵去除上清。

4. 用wan全培養(yǎng)基重新懸浮細胞并轉移到新的培養(yǎng)瓶中。為保證細胞復蘇的存活率，請將培養(yǎng)基在37℃水浴預熱后使用。

5. 將細胞置于含有合適CO2的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

貼壁細胞傳代培養(yǎng)

1. 吸取并棄掉培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基，加入PBS潤洗一次。

2. 加入1 mL 0.25 (w/v) Trypsin-EDTA 溶液，并置于37℃培養(yǎng)箱中孵育，直至細胞從壁上脫落分離。此過程大約需要3-5分鐘。

3. 加入2mL全培養(yǎng)基中和胰蛋白酶，并輕輕吹打將細胞從培養(yǎng)瓶表面吹落，并使細胞分散。

4. 將細胞懸液收集到15mL離心管里，150 g 離心 5 分鐘，用真空泵去除上清。取適量的培養(yǎng)基將細胞重懸，轉移到新的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。

懸浮細胞傳代可參考以下方法：

一、直接傳代法

1. 待懸浮細胞長滿至 80%～90%（細胞懸液變黃），即可傳代；

2. 用吸管吸棄細胞懸液 1 / 2~1 / 3；

3. 加入適量的新鮮培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)。

   二、離心傳代法（在發(fā)現(xiàn)有細胞碎片的情況下）

4. 將細胞懸液轉移到離心管內(nèi)；

5. 150 g 離心 5 min，棄去上層清液；

6. 使用新鮮的培養(yǎng)基重懸細胞；

7. 吸管吸取適量細胞懸液，裝入新的培養(yǎng)瓶，再加入適量的新鮮培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)。

細胞凍存操作

1. 1000rpm離心5分鐘去掉上清。加1 mL血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細胞密度不低于1 x 10⁶/mL，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識；

2. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80°C冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。

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